Inducción de mutaciones en Helicoverpa Armigera (Hübner) a través de la técnica de edición de genes Dipa-Crispr.

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Tesis - Facultad Ciencias Agrícolas, Programa Ingeniería Agronómica

Incluye referencias bibliográficas p. 39-40

Actualmente, las investigaciones se han centrado en revelar las bases
moleculares de los procesos metabólicos esenciales de Helicoverpa armigera con el
fin de identificar posibles blancos de ingeniería genética. Recientemente surgió la
técnica de edición de genes dirigida al parental o Direct Parental CRISPR
(DIPA-CRISPR), que podría ser útil en lepidópteros. A fin de validar la técnica en H.
armigera, fueron inyectadas 60 hembras adultas con el complejo Cas9-ARNg para
inactivar el gen Scarlet (St). El ensayo se estableció en un diseño bifactorial de
Bloques Completos al Azar (BCA), el primer factor correspondió a la inyección de
Cas9-ARNg y Agua Milli-Q® (control) en el abdomen de las hembras, mientras que
el segundo factor estuvo compuesto por los tres períodos pos-eclosión pupal (1, 2, 3
días) en que fueron realizadas las inyecciones. Un segundo experimento fue
realizado inyectando cerca de 900 huevos en la primera hora post-oviposición para
confirmar la eficacia del complejo Cas9-ARNg. Con la técnica convencional
(inyección de huevos) fue posible obtener 275 mutantes stst de ojos amarillos
(St-/-Ok+/+) y blancos (St-/-Ok-/-), logrando una eficiencia del 82% en relación a las
larvas que lograron eclosionar. Por otro lado, la técnica DIPA-CRISPR no causó
ningún efecto fenotípico evidente en las larvas de la generación cero (G0), como
tampoco afectó el número de oviposiciones de las hembras inyectadas. Sin
embargo, es necesario realizar más estudios para establecer las condiciones
óptimas que permitan manipular el genoma de lepidópteras mediante la tecnología
DIPA-CRISPR.